Come strumento ad alta precisione, HPLC può facilmente portare ad alcuni piccoli problemi problematici se non è gestito nel modo corretto durante l'uso. Uno dei problemi più comuni è il problema di compressione della colonna. Come risolvere rapidamente un cromatografo difettoso. Il sistema HPLC è costituito principalmente da una bottiglia di serbatoio, una pompa, un iniettore, una colonna, una camera di temperatura della colonna, un rivelatore e un sistema di elaborazione dei dati. Per l'intero sistema, i pilastri, le pompe e i rilevatori sono i componenti chiave e le posizioni principali che sono soggette a problemi.
La chiave per la pressione della colonna è l'area che richiede molta attenzione quando si utilizza HPLC. La stabilità della pressione della colonna è strettamente correlata alla forma cromatografica del picco, all'efficienza della colonna, all'efficienza di separazione e ai tempi di ritenzione. La stabilità della pressione della colonna non significa che il valore di pressione sia stabile a un valore stabile, ma piuttosto che l'intervallo di fluttuazione della pressione è compreso tra 345 kPa o 50psi (consentendo l'uso dell'eluizione del gradiente quando la pressione della colonna è stabile e cambia lentamente). La pressione troppo alta o troppo bassa è un problema di pressione della colonna.
Il più incline ai guasti e alle soluzioni HPLC
1, l'alta pressione è il problema più comune nell'uso di HPLC. Questo significa un improvviso aumento della pressione. In generale, ci sono i seguenti motivi: (1) In generale, ciò è dovuto al blocco del canale di flusso. A questo punto, dovremmo esaminarlo a tratti. UN. Innanzitutto, tagliare l'ingresso della pompa del vuoto. A questo punto, il tubo di sbirciatina era riempito con liquido in modo che il tubo di sbirciatina fosse più piccolo della bottiglia di solvente per vedere se il liquido gocciolava a piacimento. Se il liquido non gocciola o gocciola lentamente, la testa del filtro del solvente viene bloccata. Trattamento: immergersi in acido nitrico al 30% per mezz'ora e risciacquare con acqua ultrapura. Se il liquido gocciola in modo casuale, la testa del filtro del solvente è normale e viene controllata; B. Apri la valvola di spurgo in modo che la fase mobile non passi attraverso la colonna e se la pressione non è significativamente ridotta, la testa bianca del filtro viene bloccata. Trattamento: i bianchi filtrati sono stati rimossi e sonicati con isopropanolo al 10% per mezz'ora. Supponendo che la pressione scenda al di sotto di 100 psi, la testa bianca filtrata sia normale e viene controllata; C. Rimuovere l'estremità di uscita della colonna, se la pressione non diminuisce, la colonna viene bloccata. Trattamento: se si tratta di un blocco di sale tampone, sciacquare il 95% fino a quando la pressione è normale. Se l'ostruzione è causata da un materiale più altamente conservato, un flusso più forte rispetto all'attuale fase mobile dovrebbe essere utilizzato per correre verso la pressione normale. Se la pressione di pulizia a lungo termine non diminuisce in base al metodo sopra, l'ingresso e l'uscita della colonna possono essere considerati collegati allo strumento al contrario e la colonna può essere pulita con la fase mobile. In questo momento, se la pressione della colonna non è ancora ridotta, la piastra di setaccio dell'ingresso della colonna può essere sostituita solo, ma una volta che l'operazione non è buona, è facile condurre alla riduzione dell'effetto colonna, quindi prova a utilizzare meno. Per problemi difficili, è possibile prendere in considerazione la sostituzione della colonna.
(2) Impostazione della portata errata: la portata corretta può essere ripristinata.
(3) Rapporto di flusso errato: l'indice di viscosità di diverse proporzioni di flussi è diverso e anche la pressione del sistema corrispondente del flusso con viscosità maggiore è maggiore. Se possibile, i solventi di viscosità più bassi possono essere sostituiti o ripristinati e preparati.
(4) Drift zero di pressione del sistema: regolare lo zero del sensore a livello di liquido.
2, la pressione è troppo bassa (1) è generalmente causata dalla perdita di sistema. Cosa fare: trovare ogni connessione, in particolare l'interfaccia ad entrambe le estremità della colonna e serrare l'area di perdita. Rimuovere il palo e serrare o allineare il film PTFE con forza appropriata.
(2) Il gas entra nella pompa, ma la pressione è generalmente instabile in questo momento, alta e bassa. Più seriamente, la pompa non sarà in grado di assorbire il fluido. Metodo di trattamento: aprire la valvola di pulizia e pulire a una portata di 3 ~ 5 ml/min. In caso contrario, le bolle d'aria sono state aspirate nella valvola di scarico usando un tubo ad ago dedicato.
(3) Nessun deflusso di fase mobile: controlla se esiste una fase mobile nella bottiglia del serbatoio, se il lavandino è immerso nella fase mobile e se la pompa è in esecuzione.
(4) La valvola di riferimento non è chiusa: la valvola di riferimento è chiusa dopo la decelerazione. Di solito scende a 0,1. ~ 0,2 ml/ min dopo aver chiuso la valvola di riferimento.
Riepilogo:
In questo documento vengono analizzati solo problemi comuni nella cromatografia liquida. Naturalmente, nella nostra applicazione pratica, incontreremo più altri problemi. Nella gestione dei guasti, dovremmo seguire i seguenti principi: cambiare solo un fattore alla volta per determinare la relazione tra il fattore ipotetico e il problema; In generale, quando si sostituiscono le parti per la risoluzione dei problemi, dovremmo prestare attenzione a rimettere in atto le parti intatte smantellate per prevenire i rifiuti; Formare una buona abitudine record è la chiave per il successo della gestione dei guasti. In conclusione, quando si utilizza HPLC, è importante prestare attenzione al pretrattamento del campione e al corretto funzionamento e manutenzione dell'attrezzatura.
Tempo post: 2025-07-02