Essendo uno strumento di alta precisione, l'HPLC può facilmente portare ad alcuni piccoli problemi fastidiosi se non viene utilizzato nel modo corretto durante l'uso.Uno dei problemi più comuni è il problema della compressione delle colonne.Come risolvere rapidamente i problemi di un cromatografo difettoso.Il sistema HPLC è costituito principalmente da un serbatoio, una pompa, un iniettore, una colonna, una camera termica della colonna, un rilevatore e un sistema di elaborazione dati.Per l'intero sistema, i pilastri, le pompe e i rilevatori sono i componenti chiave e le principali posizioni soggette a problemi.
La chiave per la pressione della colonna è l'area che richiede particolare attenzione quando si utilizza l'HPLC.La stabilità della pressione della colonna è strettamente correlata alla forma del picco cromatografico, all'efficienza della colonna, all'efficienza di separazione e al tempo di ritenzione.La stabilità della pressione della colonna non significa che il valore della pressione è stabile a un valore stabile, ma piuttosto che l'intervallo di fluttuazione della pressione è compreso tra 345 kPa o 50 PSI (consentendo l'uso dell'eluizione con gradiente quando la pressione della colonna è stabile e cambia lentamente).Una pressione troppo alta o troppo bassa è un problema di pressione della colonna.
Il più incline ai guasti e alle soluzioni HPLC
1, l'alta pressione è il problema più comune nell'uso dell'HPLC.Ciò significa un improvviso aumento della pressione.In generale, ci sono i seguenti motivi: (1) In generale, ciò è dovuto al blocco del canale di flusso.A questo punto dovremmo esaminarlo a tratti.UN.Innanzitutto, tagliare l'ingresso della pompa a vuoto.A questo punto, il tubo in PEEK è stato riempito di liquido in modo che il tubo in PEEK fosse più piccolo della bottiglia del solvente per vedere se il liquido gocciolava a piacimento.Se il liquido non gocciola o gocciola lentamente, la testa del filtro del solvente è bloccata.Trattamento: immergere in acido nitrico al 30% per mezz'ora e risciacquare con acqua ultrapura.Se il liquido gocciola in modo casuale, la testa del filtro del solvente è normale e viene controllata;B.Aprire la valvola di spurgo in modo che la fase mobile non passi attraverso la colonna e, se la pressione non viene ridotta in modo significativo, la testa bianca del filtro è bloccata.Trattamento: i punti bianchi filtrati sono stati rimossi e sonicati con isopropanolo al 10% per mezz'ora.Supponendo che la pressione scenda sotto i 100PSI, la testa bianca filtrata è normale e viene controllata;C.Rimuovere l'estremità di uscita della colonna, se la pressione non diminuisce la colonna è bloccata.Trattamento: se si tratta di un blocco del sale tampone, risciacquare al 95% fino a quando la pressione è normale.Se l'ostruzione è causata da materiale maggiormente preservato, si dovrebbe utilizzare un flusso più forte dell'attuale fase mobile per raggiungere la pressione normale.Se la pressione di pulizia a lungo termine non diminuisce secondo il metodo sopra descritto, l'ingresso e l'uscita della colonna possono essere considerati collegati allo strumento al contrario e la colonna può essere pulita con la fase mobile.A questo punto, se la pressione della colonna non è ancora ridotta, la piastra del setaccio di ingresso della colonna può solo essere sostituita, ma una volta che l'operazione non è corretta, è facile portare alla riduzione dell'effetto della colonna, quindi provare a usarne di meno.Per problemi difficili, si può prendere in considerazione la sostituzione della colonna.
(2) Impostazione errata della portata: la portata corretta può essere ripristinata.
(3) Rapporto di flusso errato: l'indice di viscosità delle diverse proporzioni dei flussi è diverso e anche la pressione di sistema corrispondente del flusso con viscosità maggiore è maggiore.Se possibile, i solventi a viscosità inferiore possono essere sostituiti o reimpostati e preparati.
(4) Deriva dello zero della pressione del sistema: regolare lo zero del sensore del livello del liquido.
2, la pressione è troppo bassa (1) solitamente è causata da una perdita del sistema.Cosa fare: individuare ogni connessione, in particolare l'interfaccia su entrambe le estremità della colonna, e serrare l'area della perdita.Rimuovere il perno e serrare o rivestire la pellicola di PTFE con la forza adeguata.
(2) Il gas entra nella pompa, ma in questo momento la pressione è solitamente instabile, alta e bassa.Più seriamente, la pompa non sarà in grado di assorbire il fluido.Metodo di trattamento: aprire la valvola di pulizia e pulire a una portata di 3~5 ml/min.In caso contrario, le bolle d'aria venivano aspirate dalla valvola di scarico utilizzando un tubo ad ago dedicato.
(3) Nessun deflusso di fase mobile: controllare se è presente una fase mobile nel serbatoio, se il lavandino è immerso nella fase mobile e se la pompa è in funzione.
(4) La valvola di riferimento non è chiusa: la valvola di riferimento è chiusa dopo la decelerazione.Di solito scende a 0,1.~ 0,2 ml/min dopo la chiusura della valvola di riferimento.
Riepilogo:
In questo articolo vengono analizzati solo i problemi comuni nella cromatografia liquida.Naturalmente, nella nostra applicazione pratica, incontreremo altri problemi.Nella gestione dei guasti, dovremmo seguire i seguenti principi: modificare solo un fattore alla volta per determinare la relazione tra il fattore ipotetico e il problema;In generale, quando si sostituiscono parti per la risoluzione dei problemi, è necessario prestare attenzione a rimettere a posto le parti intatte smontate per evitare sprechi;Formare una buona abitudine di registrazione è la chiave del successo della gestione dei guasti.In conclusione, quando si utilizza l'HPLC, è importante prestare attenzione al pretrattamento del campione e al corretto funzionamento e manutenzione dell'apparecchiatura.
Orario di pubblicazione: 18 settembre 2023