Il tripeptide reagente Limulus è una sostanza tripeptide con una sequenza specifica estratta dal lisato di cellule ematiche del granchio a ferro di cavallo o sintetizzata artificialmente. Il tripeptide del reagente Limulus è un substrato cromogenico utilizzato per l'analisi quantitativa (come il test dell'endotossina batterica) per rilevare e misurare i componenti dei batteri Gram-negativi—endotossine. Quando agiscono gli enzimi attivati dalle endotossine, viene rilasciato un composto colorato (come la p-nitroanilina), consentendo di misurare l'intensità del colore e correlarla con il contenuto di endotossine.
Principio di funzionamento
Attivazione delle endotossine: in presenza di endotossine, gli amebociti nel sangue del granchio a ferro di cavallo rilasciano enzimi, innescando così la cascata della coagulazione.
Azione enzimatica: l'enzima attivato (solitamente enzima della coagulazione) agisce quindi su un substrato cromogenico.
Reazione cromogenica: l'enzima scinde il substrato, rilasciando un composto giallo chiamato p-nitroanilina (pNA).
Analisi quantitativa: l'intensità del colore giallo è proporzionale al contenuto di endotossine nel campione e viene solitamente misurata utilizzando uno spettrofotometro ad un'assorbanza di 405 nm.
Metodi di preparazione
Il tripeptide del reagente Limulus può essere ottenuto attraverso due approcci in termini di preparazione.
1. Estrazione dei componenti naturali dalle cellule del sangue di Limulus e ottenimento del tripeptide attivo mediante separazione e purificazione.
2. Utilizzo della tecnologia di sintesi in fase solida per collegare in sequenza specifiche sequenze di aminoacidi, controllando con precisione la struttura del tripeptide.
A causa delle politiche di conservazione del Limulus (con province come Zhejiang, Fujian, Guangdong e Guangxi che lo elencano come "fauna selvatica acquatica protetta chiave provinciale" / Hong Kong ha emanato regolamenti alla fine del 2012 che vietano la pesca a strascico) e poiché il processo di estrazione è complesso e impegnativo, il costo del primo metodo è relativamente alto. Pertanto, la sintesi in fase solida è ora comunemente utilizzata. Collegando in sequenza specifiche sequenze di aminoacidi, la struttura del tripeptide può essere controllata con precisione. Questo metodo non solo garantisce la stabilità e la consistenza del prodotto, ma consente anche una produzione su larga scala, soddisfacendo le esigenze dell'industria farmaceutica per testare i reagenti.
Orario di pubblicazione: 2025-11-04