La modifica della fosforilazione svolge un ruolo cruciale nella vita delle cellule e colpisce molteplici aspetti. La fosforilazione delle proteine è strettamente correlata a vari processi biologici, come la riparazione del danno al DNA, la regolazione trascrizionale, la trasduzione del segnale e la regolazione dell'apoptosi cellulare. Studiare proteine e peptidi fosforilati aiuta a rivelare i meccanismi di questi processi e approfondire la nostra comprensione dell'essenza delle attività della vita. La biotecnologia peptide di Hong possiede tecnologia di etichettatura dei peptidi di fosforilazione matura. Sfruttando i propri vantaggi tecnologici e delle materie prime, possiamo sintetizzare i peptidi contenenti serina fosforilata (PSER), treonina fosforilata (PTH) e tirosina fosforilata (PTYR) e fornire peptidi di alta qualità con siti di una fosforilazione di uno a cinque.
Panoramica della tecnologia di marcatura della fosforilazione:
I peptidi fosforilati si riferiscono principalmente ai gruppi idrossilici a catena laterale di residui di serina (Ser), tirosina (TYR) e treonina (THR) nella catena peptidica modificata in esteri di fosfato acido. I peptidi fosforilati svolgono un ruolo cruciale nello studio della fosforilazione delle proteine. Pertanto, è particolarmente importante esplorare in profondità le reazioni di fosforilazione di proteine e peptidi e trovare metodi sintetici maturi e semplici.
Al momento, i metodi per la modifica della fosforilazione dei peptidi rientrano principalmente in due categorie:
(1) Incorporare direttamente gli aminoacidi fosforilati in modo appropriato nella sequenza peptidica:
Innanzitutto, gli aminoacidi che devono essere fosforilati (come THR, Ser o Tyr) sono sottoposti a trattamento di fosforilazione e adeguatamente protetti. Quindi, seguendo il processo di sintesi di peptidi in fase solida convenzionale (SPPS), i monomeri fosforilati sono collegati ai siti specifici del polipeptide. Questo metodo è semplice da operare ed è diventato una delle tecniche principali per la modifica della fosforilazione dei punti dei peptidi.
(2) Dopo aver sintetizzato la sequenza polipeptidica sulla resina, i gruppi idrossilici a catena laterale di Ser, Tyr o Thr sono fosforilati:
Quando si eseguono la modifica della fosforilazione, se viene adottato il metodo di condensare direttamente i monomeri fosforilati nel polipeptide, l'amminoacido fosforilato, a causa della sua catena laterale più ampia, provoca un aumento del ostacolo sterico, rendendo difficile la condensa con la catena peptidica. Inoltre, anche l'introduzione dei successivi aminoacidi diventerà relativamente complessa, specialmente quando ci sono più siti di fosforilazione. Il processo di sintesi sarà estremamente difficile e il prodotto finale sarà molto complesso, rendendo difficile la separazione e la resa estremamente bassa. Pertanto, quando ci sono più siti che richiedono fosforilazione nella catena del polipeptide, si può considerare per completare prima la sintesi della sequenza polipeptidica sulla resina e quindi fosforilati i gruppi idrossilici della catena laterale di Ser, Tyr o Thr. Durante questo processo, rimuovere prima selettivamente la catena laterale che protegge i gruppi dell'amminoacido da etichettare. Per Tyr e Thr, gli aminoacidi non protetti delle loro catene laterali possono essere reagiti direttamente. I gruppi di protezione della catena laterale possono essere rimossi quantitativamente in condizioni di TFA/DCM dell'1%. In questo metodo, l'intermedio attivo di bis-benzil fosforamidato e tetrazolo può essere generato dalla reazione con quest'ultimo e può essere collegato al gruppo idrossilico. Quindi, è possibile effettuare una reazione di ossidazione in condizioni di acido perossido per generare il gruppo fosfonilico, completando la fosforilazione.
Tempo post: 2025-07-16