Gli antigeni proteici ricombinanti hanno spesso diversi epitopi, alcuni dei quali sono epitopi di sequenza e alcuni sono epitopi strutturali. Gli anticorpi policlonali ottenuti mediante animali immunizzanti con antigeni denaturati sono miscele di anticorpi specifici per i singoli epitopi e possono essere usati in generale per rilevare strutture naturali o proteine bersaglio denaturate. Un vantaggio laterale dell'uso di proteine denaturate come immunogeni è che le proteine denaturate tendono ad essere più immunogeniche e possono stimolare una forte risposta immunitaria negli animali.
Il sistema di espressione di Escherichia coli è generalmente scelto per scopi antigenici perché è il sistema più costoso in termini di tempo e denaro. Al fine di migliorare la possibilità dell'espressione della proteina target e la convenienza della purificazione, a volte viene espresso solo un piccolo frammento della proteina bersaglio, come un dominio specifico.
La struttura tridimensionale delle proteine
Il dominio specifico di una proteina
Se lo scopo della preparazione degli anticorpi è esclusivamente per il rilevamento di WB, è economico e rapido utilizzare il piccolo peptide sintetico come antigene, ma esiste un rischio di immunogenicità debole o non regolarità a causa della selezione inappropriata del segmento peptidico. Poiché la preparazione degli anticorpi richiede un lungo periodo, due o tre diversi segmenti di peptidi vengono spesso selezionati per preparare gli anticorpi usando l'antigene polipeptidico per garantire il tasso di successo dell'esperimento.
La purezza dell'antigene polipeptidico per l'immunizzazione deve essere superiore all'80%. Sebbene una purezza più elevata possa teoricamente ottenere anticorpi con una migliore specificità, in pratica, gli animali producono sempre un gran numero di anticorpi non specifici, mascherando così i benefici della purezza dell'antigene.
Inoltre, la preparazione di anticorpi da piccoli peptidi deve essere reticolato all'antigene portatore appropriato per migliorare la sua immunogenicità. Due vettori antigenici comuni sono KLH e BSA.
Tempo post: 2025-07-03