Nella ricerca biologica vengono solitamente utilizzati polipeptidi con una lunga sequenza.Per i peptidi con più di 60 aminoacidi nella sequenza, per ottenerli vengono generalmente utilizzati l'espressione genica e SDS-PAGE.Tuttavia, questo metodo richiede molto tempo e l'effetto di separazione del prodotto finale non è buono.
Sfide e soluzioni per la sintesi di peptidi lunghi
Nella sintesi di peptidi lunghi ci troviamo sempre di fronte a un problema, cioè l'ingombro sterico della reazione di condensazione aumenta con l'aumento della sequenza nella sintesi e il tempo di reazione deve essere regolato per completare la reazione.Tuttavia, più lungo è il tempo di reazione, maggiori sono gli effetti collaterali e si forma una porzione del peptide bersaglio.Tali residui – catene peptidiche carenti – sono impurità chiave prodotte nella sintesi peptidica lunga.Pertanto, nella sintesi del peptide lungo, il problema chiave che dobbiamo superare è esplorare le condizioni di reazione e i metodi di reazione di alta qualità, in modo da rendere la reazione di condensazione degli amminoacidi più completa e completa.Inoltre, ridurre il tempo di reazione, poiché quanto più lungo è il tempo di reazione, tanto più incontrollabili sono le reazioni collaterali, tanto più complessi sono i sottoprodotti.Si sintetizzano pertanto i seguenti tre punti:
La sintesi a microonde può essere utilizzata: Per alcuni amminoacidi incontrati nel processo di sintesi che non sono facili da integrare, è possibile utilizzare la sintesi a microonde.Questo metodo ha risultati notevoli e riduce notevolmente il tempo di reazione e riduce la formazione di due sottoprodotti chiave.
È possibile utilizzare il metodo di sintesi dei frammenti: Quando alcuni peptidi sono difficili da sintetizzare con i comuni metodi di sintesi e non sono facili da purificare, possiamo adottare l'intera condensazione di diversi amminoacidi in un certo segmento del peptide all'intera catena peptidica.Questo metodo può anche risolvere molti problemi nella sintesi.
Può essere utilizzata la sintesi dell'acilidrazide: la sintesi acilidrazide dei peptidi è un metodo di sintesi in fase solida del peptide Cys N-terminale e della reazione chimica selettiva dell'idrazide polipeptidica C-terminale tra la formazione di legami ammidici per ottenere il metodo di legame peptidico.In base alla posizione di Cys nella catena peptidica, questo metodo divide l'intera catena peptidica in più sequenze e le sintetizza rispettivamente.Infine, il peptide bersaglio viene ottenuto mediante reazione di condensazione in fase liquida.Questo metodo non solo riduce notevolmente il tempo di sintesi del peptide lungo, ma aumenta anche significativamente la purezza del prodotto finale.
Lunga purificazione dei peptidi
La particolarità dei peptidi lunghi porta inevitabilmente a componenti complessi di peptidi grezzi.Pertanto, è anche una sfida purificare i peptidi lunghi mediante HPLC.serie di amiloide del processo di purificazione dei polipeptidi, che assorbe molta esperienza e viene utilizzata con successo nella purificazione del peptide lungo.Adottando nuove apparecchiature, miscelando più sistemi di purificazione, separazioni ripetute e altri metodi sperimentali, il tasso di successo della purificazione dei peptidi lunghi è stato notevolmente migliorato.
Orario di pubblicazione: 18 aprile 2023