Gli antigeni proteici ricombinanti hanno spesso diversi epitopi diversi, alcuni dei quali sono epitopi di sequenza e altri sono epitopi strutturali.Gli anticorpi policlonali ottenuti immunizzando animali con antigeni denaturati sono miscele di anticorpi specifici per singoli epitopi e possono essere utilizzati in generale per rilevare strutture naturali o proteine bersaglio denaturate.Un vantaggio collaterale dell’utilizzo delle proteine denaturate come immunogeni è che le proteine denaturate tendono ad essere più immunogeniche e possono stimolare una forte risposta immunitaria negli animali.
Il sistema di espressione dell'Escherichia coli viene solitamente scelto per scopi antigenici perché è il sistema più costoso in termini di tempo e denaro.Per migliorare la possibilità dell'espressione della proteina bersaglio e la comodità della purificazione, a volte viene espresso solo un piccolo frammento della proteina bersaglio, come un dominio specifico.
La struttura tridimensionale delle proteine
Il dominio specifico di una proteina
Se lo scopo della preparazione dell'anticorpo è esclusivamente per il rilevamento del wb, è economico e rapido utilizzare un piccolo peptide sintetico come antigene, ma esiste il rischio di debole immunogenicità o non regenicità a causa della selezione inappropriata del segmento peptidico.Poiché la preparazione degli anticorpi richiede un lungo periodo, vengono spesso selezionati due o tre diversi segmenti peptidici per preparare gli anticorpi utilizzando l'antigene polipeptidico per garantire il tasso di successo dell'esperimento.
La purezza dell'antigene polipeptidico per l'immunizzazione deve essere superiore all'80%.Sebbene una purezza più elevata possa teoricamente ottenere anticorpi con una migliore specificità, in pratica gli animali producono sempre un gran numero di anticorpi non specifici, mascherando così i vantaggi della purezza dell'antigene.
Inoltre, la preparazione di anticorpi da piccoli peptidi deve essere reticolata all'antigene trasportatore appropriato per migliorarne l'immunogenicità.Due comuni portatori antigenici sono KLH e BSA.
Orario di pubblicazione: 23 marzo 2023